脲酶的作用（脲酶）

關(guān)于脲酶的作用，脲酶這個(gè)問題很多朋友還不知道，今天小六來為大家解答以上的問題，現(xiàn)在讓我們一起來看看吧！

1、隨著膨化技術(shù)在飼料工業(yè)中推廣普及，越來越多的飼料生產(chǎn)商在配方中使用膨化大豆粉，與其它蛋白資源一樣，大豆的適度熟化非常重要，熟化程度低會(huì)含抗胰蛋白酶等營養(yǎng)抑制因子，熟化度過高又會(huì)導(dǎo)致氨基酸利用率低。

2、判斷膨化大豆粉是否合格的主要指標(biāo)是脲酶活性。

3、脲酶活性是指:在30±5℃和PH值等于7的條件下，每分鐘每克膨化大豆分解尿素所釋放的氨態(tài)氮的毫克數(shù)。

4、脲酶本身無營養(yǎng)意義，但它與抗胰蛋白酶的含量接近，并且遇熱失活的程度與抗胰蛋白酶相似，因此，尿酶活性用來作為膨化大豆加熱是否合適的間接估測(cè)指標(biāo)。

5、脲酶活性沒有負(fù)值，最低為0。

6、在我國現(xiàn)行的國標(biāo)推薦值為0.3，在美國一般認(rèn)為以不超過0.2為宜，并且針對(duì)日糧中有尿素的反芻動(dòng)物而言不得超過0.12，當(dāng)然對(duì)于家禽和豬0.3或稍高都可以接受。

7、國內(nèi)很多大企業(yè)一般均采用0.2。

8、 實(shí)驗(yàn)室定量測(cè)定脲酶活性的方法較復(fù)雜，有滴定法和pH增值法兩種，已有研究表明兩者對(duì)同一樣品測(cè)得的數(shù)值也不相等。

9、目前國內(nèi)絕大部分企業(yè)都采用快速而簡單的簡易判定方法定性地估測(cè)脲酶活性，一般來說，主要有如下兩種方法。

10、一.液態(tài)法1.原理:大豆制品中的脲酶可使尿素分解成氨，會(huì)使酚紅指示劑改變顏色。

11、2.試劑2.1尿素:GB696，分析純。

12、2.2酚紅指示劑2.2.1稱取0.1g酚紅，加1.43mL0.1mol/L氫氧化鈉溶液，在研缽中研磨以促溶解;2.2.2轉(zhuǎn)移至250mL定量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻備用。

13、3.操作方法3.1取0.2g粉末樣品，置于25mL比色管中。

14、3.2加0.02g尿素，加酚紅指示劑2滴，再加水20mL，充分搖勻15s。

15、3.3記錄粉紅色出現(xiàn)時(shí)間，并根據(jù)時(shí)間判斷尿酶活性，顏色出現(xiàn)時(shí)間應(yīng)少于15min。

16、顏色出現(xiàn)時(shí)間 脲酶活性1min 極強(qiáng)1~5min 強(qiáng)5~15min 稍有15min 無同時(shí)作空白對(duì)照試驗(yàn)。

17、樣品空白(不加尿素)及試劑空白(不加樣品)，只有上述空白正常時(shí)，即酚紅指示劑不改變顏色，試驗(yàn)結(jié)果才是可靠的。

18、一般企業(yè)認(rèn)為7、8分鐘變色較為合適。

19、二、半固態(tài)法1.原理:大豆制品中的脲酶可使尿素分解成氨，會(huì)使酚紅指示劑改變顏色。

20、2.試劑2.1稀硫酸(H2SO4)0.2N。

21、2.2尿素一酚紅試劑2.2.1將1.2克酚紅溶解于30ml0.2N的NaOH中;2.2.2用蒸餾水將之稀釋至約300mL;2.2.3加入90g尿素(分析純)并溶解之;2.2.4用蒸餾水稀釋至2L;2.2.5加入14mL 1.0N的H2SO4或70mL o.2N的H2SO4;2.2.6用蒸餾水稀釋至最后體積3L;2.2.7溶液應(yīng)具明亮的琥珀色。

22、3.操作方法3.1在一個(gè)150ml的燒杯中倒入少量試劑，注意溶液必須呈明亮的琥珀色。

23、若溶液已轉(zhuǎn)變?yōu)樯罱奂t色，滴人稀硫酸溶液并攪拌之，直至溶液再度呈琥珀色。

24、3.2量一匙粉末樣品，放置于培養(yǎng)皿中。

25、3.在樣品上加入兩匙試劑，輕輕攪拌，將樣品平鋪于培養(yǎng)皿中。

26、若仍有干樣品斑點(diǎn)，則再加入試劑，直至將樣品浸濕。

27、4.放置5分鐘后觀察:a. 沒有任何紅點(diǎn)出現(xiàn):再任其放置25分鐘，若仍無紅點(diǎn)出現(xiàn)，說明大豆粉過熟。

28、b. 有少量紅點(diǎn):少量尿素酶活性，可用。

29、c. 樣品表面約有25%為紅點(diǎn)覆蓋:少量尿素酶活性，可用。

30、d. 豆餅表面約有50%為紅點(diǎn)覆蓋:尿素酶活性較高，不可以使用。

31、e. 豆餅表面的75%-100%為紅點(diǎn)覆蓋:尿素酶活性很高，樣品過生，不能使用。

32、以上兩種簡易脲酶活性估測(cè)方法在國內(nèi)各飼料廠被廣泛采用，尤其是后者在膨化大豆粉生產(chǎn)的在線檢測(cè)上很普遍。

33、盡管這兩種方法原理一樣，但是，因其操作過程差異，所以對(duì)膨化大豆粉品質(zhì)的反映內(nèi)容也不盡相同。

34、三、液態(tài)法和半固態(tài)法之比較首先需要說明的是，這兩種脲酶活性快速檢測(cè)方法沒有行業(yè)約定俗成的名稱，筆者接觸過的企業(yè)均只采用其中的一種方法，對(duì)前者可以稱之為“試管法”，后者稱之為“表面皿法”，根據(jù)其實(shí)施的過程及樣品的狀態(tài)，筆者將其區(qū)分為“液態(tài)法”和“半固態(tài)法”。

35、從實(shí)施方法來看，液態(tài)法是過程檢測(cè)，從開始一直到規(guī)定時(shí)間段結(jié)束，而半固態(tài)法屬于斷點(diǎn)檢測(cè)，是5分鐘后看結(jié)果;液態(tài)法通過控制各個(gè)體合格，總體自然合格，而半固態(tài)法要求的是總體符合統(tǒng)計(jì)學(xué)上的合格，即允許部分個(gè)體不合格。

36、簡單地說，液態(tài)法要求每一個(gè)微粒的熟化程度均要滿足5分鐘以內(nèi)不變色，如果一個(gè)不合格，整個(gè)批次為不合格;而半固態(tài)法允許部分微粒在5分鐘內(nèi)變色，部分不合格，總體可以是合格的。

37、從這點(diǎn)上來說，液態(tài)法對(duì)膨化大豆粉的品質(zhì)要求更高，控制更嚴(yán)格，不僅要求熟化，而且要均勻熟化。

38、舉例說明，如果在熟化完全的大豆粉樣品中摻入微量(可以是一粒)生大豆粉，液態(tài)法會(huì)立即變色從而判定為不合格，而半固態(tài)法只是增加了一個(gè)變色點(diǎn)，總體上仍是合格的。

39、從上可以看出，這兩種檢測(cè)方法對(duì)膨化大豆粉品質(zhì)的反映內(nèi)容是不一樣的。

40、半固態(tài)法反映的是產(chǎn)品符合統(tǒng)計(jì)學(xué)上的合格，而液態(tài)法反映的是完全合格。

41、這兩種不同檢測(cè)方法對(duì)膨化設(shè)備的要求也是有差別的，液態(tài)法要求設(shè)備能均勻熟化，而半固態(tài)法允許產(chǎn)品出現(xiàn)部分不合格，只要總體上符合就可以，對(duì)膨化設(shè)備的要求自然要低。

42、可能會(huì)有人疑問，膨化大豆粉出來的不都應(yīng)該是均勻一致的嗎?其實(shí)不然，物料在膨化機(jī)內(nèi)受到濕、熱、機(jī)械剪切的共同作用從而熟化，機(jī)械剪切對(duì)膨化大豆粉所起的作用大約能占三成多，如果結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)上缺陷或部件磨損，就會(huì)導(dǎo)致熟化不均勻。

43、目前濕法膨化大豆粉的出料溫度大都在135度左右(對(duì)家禽和豬要求可能低點(diǎn))，六年前，筆者曾遇到過膨化大豆粉出料溫度在170度，用液態(tài)法檢測(cè)仍不合格，出來的料有熟的，有褐變的，還有少許夾生的，如果用半固態(tài)法檢測(cè)，估計(jì)就合格了。

44、次年，一膨化廠使用某企業(yè)膨化機(jī)生產(chǎn)膨化大豆粉，因不熟被退貨六十噸，根據(jù)大部分企業(yè)采用半固態(tài)法檢測(cè)的情況，將其以一定比例摻入熟化料中，最終符合統(tǒng)計(jì)學(xué)上的合格。

45、上述事件，大概就是這兩種不同測(cè)定方法的實(shí)踐意義吧。

46、 脲酶urease(水解酶): 脲酶試驗(yàn)原理: 存在于大多數(shù)細(xì)菌、真菌和高等植物里。

47、它是一種酰胺酶、能酶促有機(jī)物質(zhì)分子中酶鍵的水解。

48、脲酶的作用是極為專性的，它僅能水解尿素，水解的最終產(chǎn)物是氨和碳酸。

49、土壤脲酶活性，與土壤的微生物數(shù)量、有機(jī)物質(zhì)含量、全氮和速效磷含量呈正相關(guān)。

50、根際土壤脲酶活性較高，中性土壤脲酶活性大于堿性土壤。

51、人們常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素狀況。

52、 土壤中脲酶活性的測(cè)定是以脲素為基質(zhì)經(jīng)酶促反應(yīng)后測(cè)定生成的氨量，也可以通過測(cè)定未水解的尿素量來求得。

53、本方法是測(cè)定生成的氨量。

54、 試劑:1)甲苯 2)10%尿素:稱取10g尿素，用水溶至100ml。

55、 3)檸檬酸鹽緩沖液(PH6.7):184克檸檬酸和147.5克氫氧化鉀溶于蒸餾水。

56、將兩溶液合并，用1mol/LNaOH將PH調(diào)至6.7，用水稀釋至1000毫升。

57、 4)苯酚鈉溶液(1.35mol/L):62.5克苯酚溶于少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀釋至100毫升(A)，存于冰箱中;27克NaOH溶于100毫升水(B)。

58、將AB溶液保存在冰箱中。

59、使用前將2溶液各20毫升混合，用蒸餾水稀釋至100毫升。

60、 5)次氯酸鈉溶液:用水稀釋試劑，至活性氯的濃度為0.9%，溶液穩(wěn)定。

61、 6)氮的標(biāo)準(zhǔn)溶液:a 精確稱取0.4717克硫酸銨溶于水并稀釋至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的標(biāo)準(zhǔn)液 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:吸取配置好的氮溶液10ml，定容至100ml，即稀釋了10倍，吸取1，3，5，7，9，11，13ml移至50ml容量瓶，加水至20ml，再加入4ml苯酚鈉，仔細(xì)混合，加入3ml次氯酸鈉，充分搖蕩，放置20分鐘,用水稀釋至刻度。

62、將著色液在紫外分光光度計(jì)上于578nm處進(jìn)行比色測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，以光密度值為縱坐標(biāo)繪制曲線圖。

63、 取新鮮土壤7份，每份30g，裝于棕色廣口瓶中，先將1，3-二氯丙烯溶于丙酮(定量)，6份分別加入不同濃度均為1.5ml的1，3-二氯丙烯，使之在土壤中的濃度分別為10、50、100、200、500μg/g，另1份相應(yīng)加入1.5ml的丙酮作為對(duì)照，然后調(diào)節(jié)土壤的含水量至最大田間持水量的60%(記錄此時(shí)重量，以便補(bǔ)充水分)。

64、放置于25℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)后第0d、1d，5d，10d(前10d密封，后來測(cè)定的敞口)、20d，30d，40d，50d分別取土樣檢測(cè)脲酶的活性。

65、取樣前，反復(fù)旋轉(zhuǎn)廣口瓶，混勻土樣，一個(gè)處理隨機(jī)取3個(gè)重復(fù)。

66、 1) 稱取5g過1mm篩的風(fēng)干土樣于100ml容量瓶中。

67、 2) 向容量瓶中加入1ml甲苯(以能全部使土樣濕潤為度)并放置15分鐘 3) 之后加入10ml 10%尿素溶液和20ml檸檬酸緩沖液(PH6.7)，并 仔細(xì)混合 4) 將容量瓶放入37攝氏度恒溫箱中，培養(yǎng)24h 5) 培養(yǎng)結(jié)束后，用熱至38攝氏度水稀釋至刻度，仔細(xì)搖蕩，并將懸液用致密濾紙過濾于三角瓶中。

68、 6) 顯色:吸取3ml濾液于50ml容量瓶中，加入10ml蒸餾水，充分震蕩，然后加入4ml苯酚鈉，仔細(xì)混合，再加入3ml次氯酸鈉，充分搖蕩，放置20分鐘，用水稀釋至刻度，溶液呈現(xiàn)(青定)酚的藍(lán)色。

69、 7) 1h內(nèi)在((青定)酚的藍(lán)色在1h內(nèi)保持穩(wěn)定)在分光光度計(jì)上用1cm液槽，于578nm處將顯色液進(jìn)行比色測(cè)定。

70、 8) 無土對(duì)照:不加土樣，其他操作與樣品實(shí)驗(yàn)相同。

71、以檢驗(yàn)試劑純度，整個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)置一個(gè)對(duì)照 9)無基質(zhì)對(duì)照:以等體積的水代替基質(zhì)，其他操作與樣品實(shí)驗(yàn)相同。

72、每個(gè)土樣都設(shè)此對(duì)照。

73、 結(jié)果計(jì)算:土壤脲酶活性以24小時(shí)后100g土壤中NH3-N的毫克數(shù)表示。

74、 M=(X樣品-X無土-X無基質(zhì))*100*10 式中:M-土壤脲酶活性值 X樣品――樣品實(shí)驗(yàn)的光密度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上對(duì)應(yīng)的NH3-N毫克數(shù) X無土――無土對(duì)照實(shí)驗(yàn)中的光密度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上對(duì)應(yīng)的NH3-N毫克數(shù) X無基質(zhì)――無基質(zhì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)中的光密度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上對(duì)應(yīng)的NH3-N毫克數(shù) 100 ――樣品定容的體積與測(cè)定時(shí)吸取量的比值 10 ――酶活性單位的土重與樣品土重之比值 注意事項(xiàng):當(dāng)脲酶活性為3-80微克NH3-N時(shí)，本法能獲得可靠結(jié)果。

75、當(dāng)脲酶活性小于3微克NH3-N，培養(yǎng)時(shí)間需增至24小時(shí)(已經(jīng)24h了)(計(jì)算時(shí)應(yīng)考慮這一點(diǎn)) 計(jì)算:脲酶活性以24h后1g土壤中NH3-N的mg數(shù)表示。

76、 NH3-N(mg)=a*2 A:從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得NH3-N毫克數(shù) 2 :換算成1k土的系數(shù)。

本文分享完畢，希望對(duì)大家有所幫助。

標(biāo)簽：