實(shí)驗(yàn)室確定細(xì)菌生長(zhǎng)密度和生長(zhǎng)期，多根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和目測(cè)推斷細(xì)菌的生長(zhǎng)密度。在遇到要求較高的實(shí)驗(yàn)，需要采用分光光度計(jì)準(zhǔn)確測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度。OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長(zhǎng)的標(biāo)準(zhǔn)方法。以未加菌液的培養(yǎng)液作為空白液，之后定量培養(yǎng)后的含菌培養(yǎng)液。2、OD值的名詞解釋與測(cè)量方法的實(shí)現(xiàn)2.1 OD值名詞定義：OD是optical density（光密度）的縮寫，表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度，是檢測(cè)方法里的專有名詞，檢測(cè)單位用OD值表示，1OD=log10（1/trans），其中trans為檢測(cè)物的透光率T值。光通過被檢測(cè)物，前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量，特定波長(zhǎng)下，同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。2.2 測(cè)量方法的實(shí)現(xiàn)：知道的測(cè)量原理就是用分光光度計(jì)來實(shí)現(xiàn)，包括可見和紫外分光光度計(jì)都可以，因?yàn)椴ㄩL(zhǎng)是在600nm，市面上所有的分光光度計(jì)都可以滿足要求，但根據(jù)實(shí)驗(yàn)者對(duì)測(cè)量數(shù)據(jù)的精度和準(zhǔn)確度的要求可以選擇不同檔次的光度計(jì)來實(shí)現(xiàn)。也有部分廠家的光度計(jì)直接支持OD600，例如天美的UV1100。如果是普通的分光光度計(jì)我們也可以實(shí)現(xiàn)OD600的測(cè)定，第一步在儀器的光度計(jì)模式中，先把波長(zhǎng)走到600nm；第二步放入我們的空白樣品，進(jìn)行調(diào)零操作；第三步放入樣品直接顯示樣品的T值（透過率值），之后帶入OD值與T值的換算公式中可以得到OD600。個(gè)人感覺以后光度計(jì)可以直接增加測(cè)定OD值的功能，簡(jiǎn)單的辦法就是在測(cè)量模式中直接加入OD選項(xiàng)，只需要簡(jiǎn)單的編程就可以。 分光光度計(jì)要測(cè)量的樣品必須是均一的溶液，不能有沉淀，如果有沉淀的話就要搖勻。為了保證正確操作，必須針對(duì)每種微生物和每臺(tái)儀器用顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，做出校正曲線。實(shí)驗(yàn)中偶爾會(huì)出現(xiàn)菌液的OD值出現(xiàn)負(fù)值，原因是采用了顯色的培養(yǎng)基，即細(xì)菌培養(yǎng)一段時(shí)間后，與培養(yǎng)基反應(yīng)，發(fā)生變色反應(yīng)。另外，需要注意的是，測(cè)試的樣品不能離心，保持細(xì)菌懸浮狀態(tài)。注意，一般來說樣品的吸光度值在0.1-1.5Abs之間可以保證儀器的準(zhǔn)度和測(cè)量結(jié)果的線性關(guān)系。對(duì)于濃度過度的樣品建議稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。 分光光度計(jì)的重要配件—— 比色杯比色杯按照材質(zhì)大致分為石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根據(jù)不同的測(cè)量體積，有比色杯和毛細(xì)比色杯等。一般測(cè)試核酸和紫外定量蛋白，均采用石英杯或者玻璃杯，但是不適合比色法測(cè)定。因?yàn)榉磻?yīng)中的染料（如考馬斯亮蘭）能讓石英和玻璃著色，所以必須采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不適合用于在紫外范圍內(nèi)測(cè)試樣品。 由于另外測(cè)試的樣品量不同，所以一般分光光度計(jì)廠家提供不同容積的比色杯以滿足用戶不同的需求。市場(chǎng)已經(jīng)存在一種既可用于核酸、紫外蛋白質(zhì)定量，亦可用于蛋白比色法測(cè)定的塑料杯，樣品用量?jī)H需50μl，比色杯單個(gè)無菌包裝，可以回收樣品。如Eppendorf UVette®塑料比色杯，比色杯市場(chǎng)上一個(gè)革新。隨著生命科學(xué)以及相關(guān)學(xué)科發(fā)展，對(duì)此類科學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究提出更高的要求，分光光度計(jì)將是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室不可缺少的儀器，也成為微生物、食品、制藥等相關(guān)實(shí)驗(yàn)室的必備設(shè)備之一。
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