酵母雙雜交原理及試驗(yàn)方法（酵母雙雜交原理）

關(guān)于酵母雙雜交原理及試驗(yàn)方法，酵母雙雜交原理這個(gè)問(wèn)題很多朋友還不知道，今天小六來(lái)為大家解答以上的問(wèn)題，現(xiàn)在讓我們一起來(lái)看看吧！

1、酵母雙雜交法的原理：典型的真核生物轉(zhuǎn)錄因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域： DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DNA-binding domain)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(transcription-activating domain)。

2、前者可識(shí)別DNA上的特異序列， 并使轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域定位于所調(diào)節(jié)的基因的上游， 轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域可同轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的其他成分作用， 啟動(dòng)它所調(diào)節(jié)的基因的轉(zhuǎn)錄。

3、擴(kuò)展資料：酵母雙雜交系統(tǒng)能在體內(nèi)測(cè)定蛋白質(zhì)的結(jié)合作用， 具有高度敏感性。

4、主要是由于：采用高拷貝和強(qiáng)啟動(dòng)子的表達(dá)載體使雜合蛋白過(guò)量表達(dá)。

5、2、信號(hào)測(cè)定是在自然平衡濃度條件下進(jìn)行， 而如免疫共沉淀等物理方法為達(dá)到此條件需進(jìn)行多次洗滌，降低了信號(hào)強(qiáng)度。

6、3、雜交蛋白間穩(wěn)定度可被激活結(jié)構(gòu)域和結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物而增強(qiáng)， 后者又與啟動(dòng)子DNA結(jié)合， 此三元復(fù)合體使其中各組分的結(jié)合趨于穩(wěn)定。

7、4、通過(guò)mRNA產(chǎn)生多種穩(wěn)定的酶使信號(hào)放大。

8、同時(shí)， 酵母表型， X-Gal及HIS3蛋白表達(dá)等檢測(cè)方法均很敏感。

9、在研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)功能特點(diǎn)、作用方式過(guò)程中，有時(shí)還要通過(guò)突變、加抑制劑等手段破壞蛋白質(zhì)間的相互作用。

10、針對(duì)實(shí)際工作中的這種需要,Vidal等人發(fā)展了所謂的逆雙雜交系統(tǒng)（reverse two-hybrid system）。

11、這項(xiàng)技術(shù)的關(guān)鍵是報(bào)道基因URA3的引入。

12、URA3基因在這里起到了反選擇的作用，它編碼的酶是尿嘧啶合成的關(guān)鍵酶。

13、參考資料來(lái)源：百度百科——酵母雙雜交。

本文分享完畢，希望對(duì)大家有所幫助。

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