cck8實(shí)驗(yàn)過程（cck 8實(shí)驗(yàn)方法）

關(guān)于cck8實(shí)驗(yàn)過程，cck 8實(shí)驗(yàn)方法這個(gè)問題很多朋友還不知道，今天小六來為大家解答以上的問題，現(xiàn)在讓我們一起來看看吧！

1、方法/步驟分步閱讀1/5先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞到培養(yǎng)板內(nèi)。

2、2/5按比例（例如：1/2比例）依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每個(gè)濃度建議3-6個(gè)復(fù)孔。

3、3/5接種后培養(yǎng)2-4小時(shí)使細(xì)胞貼壁，然后加CCK試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定OD值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)（X軸），OD值為縱坐標(biāo)（Y軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4、根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK后的培養(yǎng)時(shí)間。

5、）4/5在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。

6、將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)一段時(shí)間（37℃,5% CO2），向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)），將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。

7、5/5用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。

8、若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。

9、24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

10、總結(jié)：1/1先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量,然后接種細(xì)胞。

11、2、按比例 ( 例如:1/2比例 ) 依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度。

12、3、建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。

13、注意事項(xiàng)如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基。

14、當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

本文分享完畢，希望對(duì)大家有所幫助。

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