熒光成像技術(shù)是生物學(xué)研究中一種必不可少的工具,用于活細(xì)胞和固定后細(xì)胞的蛋白定位和定量。使用傳統(tǒng)技術(shù)(如共聚焦顯微)時(shí),成像的分辨率不但會(huì)受到顯微鏡的限制,還會(huì)受到衍射波長(zhǎng)為 200 nm 左右的影響。在過(guò)去的二十年中,超分辨率顯微技術(shù) (SRM) 得到了長(zhǎng)足的發(fā)展,包括光激活定位顯微技術(shù) (PALM) 和直接隨機(jī)光學(xué)重建顯微技術(shù) (dSTORM),其原理是“繞開(kāi)”光的衍射極限,從而將分辨率大幅提高(最高可達(dá)十倍)。PALM 和 dSTORM 都是單分子成像技術(shù),都是運(yùn)用特定波長(zhǎng)的光對(duì)單個(gè)熒光基團(tuán)進(jìn)行按序和重復(fù)的激活和失活。成千上萬(wàn)的熒光基團(tuán)經(jīng)過(guò)定位,然后通過(guò)數(shù)字技術(shù)重建為“超分辨率”圖像。
在熒光成像技術(shù)中,需要使用明亮的熒光基團(tuán)對(duì)生物分子進(jìn)行精確標(biāo)定?;羧A德·休斯醫(yī)學(xué)研究所 (HHMI) 旗下 Janelia Research Campus 的 Luke Lavis 實(shí)驗(yàn)室最近研發(fā)出了一系列基于羅丹明的熒光染料,被稱為 Janelia Fluor® 熒光染料,該項(xiàng)成果首次發(fā)表于 Grimm et al 2015 年的文章中。
該系列染料既可以用于傳統(tǒng)成像技術(shù),例如共聚焦顯微,也可以用于超分辨率顯微技術(shù),包括 dSTROM。此外,還研發(fā)出了一系列可光激活的衍生物,可用于 PALM(參見(jiàn) Grimm et al 2016)。
Janelia Fluor® 料明亮度高,并具備光穩(wěn)定性,更重要的是,這種染料具有細(xì)胞透性,能夠用于活細(xì)胞成像。這種小分子熒光基團(tuán)以 NHS 酯形式提供,可用于抗體,并可兼容自定義標(biāo)記系統(tǒng)。Tocris 從霍華德·休斯醫(yī)學(xué)研究所 Janelia Research Campus 獲得了 Janelia Fluor® 染料及其光激活衍生物的許可,在 2017 年將其推向市場(chǎng)。
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