熒光成像技術是生物學研究中一種必不可少的工具,用于活細胞和固定后細胞的蛋白定位和定量。使用傳統(tǒng)技術(如共聚焦顯微)時,成像的分辨率不但會受到顯微鏡的限制,還會受到衍射波長為 200 nm 左右的影響。在過去的二十年中,超分辨率顯微技術 (SRM) 得到了長足的發(fā)展,包括光激活定位顯微技術 (PALM) 和直接隨機光學重建顯微技術 (dSTORM),其原理是“繞開”光的衍射極限,從而將分辨率大幅提高(最高可達十倍)。PALM 和 dSTORM 都是單分子成像技術,都是運用特定波長的光對單個熒光基團進行按序和重復的激活和失活。成千上萬的熒光基團經過定位,然后通過數(shù)字技術重建為“超分辨率”圖像。
在熒光成像技術中,需要使用明亮的熒光基團對生物分子進行精確標定?;羧A德·休斯醫(yī)學研究所 (HHMI) 旗下 Janelia Research Campus 的 Luke Lavis 實驗室最近研發(fā)出了一系列基于羅丹明的熒光染料,被稱為 Janelia Fluor® 熒光染料,該項成果首次發(fā)表于 Grimm et al 2015 年的文章中。
該系列染料既可以用于傳統(tǒng)成像技術,例如共聚焦顯微,也可以用于超分辨率顯微技術,包括 dSTROM。此外,還研發(fā)出了一系列可光激活的衍生物,可用于 PALM(參見 Grimm et al 2016)。
Janelia Fluor® 料明亮度高,并具備光穩(wěn)定性,更重要的是,這種染料具有細胞透性,能夠用于活細胞成像。這種小分子熒光基團以 NHS 酯形式提供,可用于抗體,并可兼容自定義標記系統(tǒng)。Tocris 從霍華德·休斯醫(yī)學研究所 Janelia Research Campus 獲得了 Janelia Fluor® 染料及其光激活衍生物的許可,在 2017 年將其推向市場。
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