關(guān)于bradford法測(cè)蛋白含量原理，bradford法測(cè)蛋白濃度這個(gè)問(wèn)題很多朋友還不知道，今天小六來(lái)為大家解答以上的問(wèn)題，現(xiàn)在讓我們一起來(lái)看看吧！
1、一、原理不同BCA蛋白定量：堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，吸光強(qiáng)度與蛋白濃度成正比。
2、測(cè)定其在562nm處的吸收值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，即可計(jì)算待測(cè)蛋白的濃度。
3、Bradford法蛋白定量：在一定的濃度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物在波長(zhǎng)為595nm處的光吸收與蛋白質(zhì)含量成正比，通過(guò)測(cè)定595nm處光吸收的增加量可知與其結(jié)合蛋白質(zhì)的量。
4、二、樣品中物質(zhì)含量不同BCA蛋白定量：樣品中高達(dá)5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20、60、80。
5、Bradford法蛋白定量：樣品中SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20、60、80低于0.015%。
6、擴(kuò)展資料BCA蛋白定量的注意事項(xiàng)：BCA蛋白定量時(shí)，吸光度可隨時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，且顯色反應(yīng)會(huì)隨溫度升高而加快，故如果濃度較低，適合較高溫度孵育or延長(zhǎng)孵育時(shí)間。
7、2、標(biāo)準(zhǔn)蛋白液的加量應(yīng)當(dāng)準(zhǔn)確，如果加量不準(zhǔn)確，會(huì)導(dǎo)致制作出來(lái)的標(biāo)準(zhǔn)曲線出現(xiàn)偏差，影響待測(cè)樣品的濃度計(jì)算，所以一方面需要用梯度稀釋的方法來(lái)配置標(biāo)準(zhǔn)蛋白液，另一方面應(yīng)使用精確度高的移液槍。
8、3、為加快BCA蛋白定量測(cè)定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱，但切勿過(guò)熱。
9、?4、當(dāng)結(jié)果出現(xiàn)空白組本身就有較高的背景，可用Bradford法蛋白定量重新測(cè)定蛋白濃度。
10、參考資料來(lái)源:百度百科-蛋白定量。
本文分享完畢，希望對(duì)大家有所幫助。
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