費城，2019年8月12日——99%的宮頸癌是由人乳頭瘤病毒引起的(人乳頭瘤病毒)。200多種人乳頭瘤病毒，其中一些與不同程度的癌癥風(fēng)險有關(guān)，使診斷和治療復(fù)雜化。愛思唯爾發(fā)表在《分子診斷》雜志上的一份報告描述了一種新的“二合一”診斷方法，它不僅能檢測人乳頭瘤病毒感染的類型，還能指示癌前標(biāo)志物。該測試可以提高診斷風(fēng)險最高的人乳頭瘤病毒感染的能力，以低成本提供快速結(jié)果，并有助于避免不必要的診斷程序。
“我們開發(fā)了人乳頭瘤病毒RNA-Seq，這是一種新的體外分子診斷程序，用于檢測高危人乳頭瘤病毒感染，并識別患有高級別鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)的患者，這是宮頸癌的癌前階段?！叭巳轭^瘤病毒RNA-Seq是一種獨特的檢測方法，它結(jié)合了分子檢測(人乳頭瘤病毒分型)和宮頸細(xì)胞學(xué)(細(xì)胞表型分析)的優(yōu)勢，”東巴黎大學(xué)巴斯德研究所和法國邁松-阿爾福特國家獸醫(yī)學(xué)院生物研究所病原體發(fā)現(xiàn)實驗室首席研究員Marc Eloit解釋道。
宮頸癌篩查允許在癌癥發(fā)展之前檢測和治療癌前病變。目前篩查要么側(cè)重于檢測人乳頭瘤病毒，要么側(cè)重于通過細(xì)胞學(xué)鑒定異常宮頸細(xì)胞。然而，檢測病毒的脫氧核糖核酸或核糖核酸的分子診斷測試在識別癌癥或癌前病變方面很差。使用巴氏試驗分析宮頸細(xì)胞，即使結(jié)合高危人乳頭瘤病毒分子檢測，也會導(dǎo)致大量不必要的陰道鏡檢查，這是一種侵入性檢查，醫(yī)生可以通過它直觀地檢查宮頸病變。
在這項概念驗證研究中，人乳頭瘤病毒RNA-Seq用于分析來自55名患者、28名低度鱗狀上皮內(nèi)病變患者(LSIL)和27名HSIL癌前病變患者的樣本。
人乳頭瘤病毒RNA-Seq可以在一組16個人乳頭瘤病毒高危人群中檢測并確定人乳頭瘤病毒感染的類型，其結(jié)果與廣泛使用并獲得官方批準(zhǔn)的人乳頭瘤病毒DNA分子診斷試劑盒相當(dāng)。事實上，人乳頭瘤病毒RNA-Seq檢測到的兩個人乳頭瘤病毒陽性患者多于DNA檢測到的患者，并且發(fā)現(xiàn)了更多患有各種人乳頭瘤病毒感染的患者。
發(fā)現(xiàn)該測試具有97.3%的靈敏度(檢測人乳頭瘤病毒的能力)和93.8%的陰性預(yù)測值(凈現(xiàn)值，無人乳頭瘤病毒的可能性)。埃洛伊特教授指出：“有效的宮頸癌篩查需要對高風(fēng)險的人乳頭瘤病毒感染進(jìn)行高敏感性和NPV，因為人乳頭瘤病毒陰性的女性通常只需在幾年后再次接受檢測。
細(xì)胞學(xué)被用作對人乳頭瘤病毒患者進(jìn)行分類的快速方法，組織學(xué)被認(rèn)為是宮頸癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。然而，組織學(xué)分析更具侵入性，需要更多時間才能得出結(jié)果。為了確定新的檢測方法在宮頸癌分類中是否有一席之地，研究人員還將細(xì)胞學(xué)與人乳頭瘤病毒RNA-Seq進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)了高級細(xì)胞學(xué)的標(biāo)志。人乳頭瘤病毒核糖核酸-SEQ的診斷表現(xiàn)令人鼓舞，可以作為分類測試。他們還發(fā)現(xiàn)，人乳頭瘤病毒RNA-Seq和組織學(xué)(PPV，人乳頭瘤病毒感染的可能性)的陽性預(yù)測值始終高于細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)。“與細(xì)胞學(xué)相比，這一觀察有利于人乳頭瘤病毒RNA-Seq可能增加的醫(yī)學(xué)價值，”埃洛伊特教授評論道。
埃洛特教授建議，在一些患者中使用人乳頭瘤病毒核糖核酸序列有助于消除不必要的陰道鏡檢查。他還預(yù)計，這項技術(shù)將允許多個樣本同時運行，每次測試的成本將降至10至20美元。這項測試也可以應(yīng)用于其他與人乳頭瘤病毒相關(guān)的癌癥，如肛門癌和頭頸癌。
人乳頭瘤病毒RNA-Seq是基于多重逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)和下一代測序(NGS)的雙重結(jié)合。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)是一種靈敏的方法來測量少量的核糖核酸，即反映人乳頭瘤病毒基因活性的遺傳物質(zhì)。NGS可以準(zhǔn)確地表征擴增病毒序列的多樣性。通過這種方法，可以在樣本中檢測到多達(dá)16種高風(fēng)險或假定的高風(fēng)險人乳頭瘤病毒和癌前標(biāo)志物的存在。
“我們的方法遵循了當(dāng)前開發(fā)用于分子診斷的NGS擴增子板的趨勢，同時不斷適應(yīng)傳統(tǒng)的分子檢測格式。這種靈活性可以使人乳頭瘤病毒RNA-Seq成為許多實驗室方便、強大和經(jīng)濟(jì)的解決方案，”主要作者Philippe補充道。法國巴黎巴斯德研究所感染單位生物學(xué)病原體發(fā)現(xiàn)實驗室博士。
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