使用常規(guī)血液樣本，研究人員開發(fā)了一種極其靈敏的檢測方法，用于檢測和量化患者癌細(xì)胞中含有罕見基因突變的 DNA 片段。該測定使用“超選擇性”PCR 引物，實(shí)際上忽略了源自患者正常細(xì)胞的大量密切相關(guān)的非突變 DNA 片段。這種新的檢測方法比目前的方法更快、更便宜，并且可以在廣泛使用的儀器上進(jìn)行。研究人員在《分子診斷雜志》的一份新報告中證明了這種方法的實(shí)用性。
“這項(xiàng)研究的長期目標(biāo)是開發(fā)高度多重化驗(yàn)，以便在出現(xiàn)任何癥狀之前及早發(fā)現(xiàn)與癌癥相關(guān)的突變，并應(yīng)用有效的早期治療。這些化驗(yàn)將使用無創(chuàng)液體活檢(常規(guī)血液樣本)在一個人的年度體檢期間采集，然后將通過高度多重實(shí)時或數(shù)字 PCR 技術(shù)分析暫時存在于血液樣本中的 DNA 片段(源自已死亡的細(xì)胞)，”首席研究員 Diana Yaneth Vargas 解釋說, MS 和 Fred Russell Kramer, Ph.D.，來自美國新澤西州紐瓦克羅格斯大學(xué)新澤西醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生研究所
當(dāng)前分析液體活檢的技術(shù)包括昂貴、冗長且靈敏度有限的下一代序列分析;或者使用 PCR 技術(shù)，其中突變 DNA 片段和密切相關(guān)的野生型 DNA 片段都被擴(kuò)增，當(dāng)突變 DNA 片段很少時限制靈敏度。另一方面，SuperSelective PCR 引物的獨(dú)特設(shè)計能夠擴(kuò)增突變 DNA 片段，同時有效防止大量密切相關(guān)的野生型 DNA 片段的擴(kuò)增。因此，本報告中描述的超選擇性 PCR 檢測非常敏感。
多重超選擇性 PCR 檢測，利用頻繁的非侵入性液體活檢，能夠選擇和隨后修改用于治療個體癌癥的有效靶向療法。此外，在治療后，這些化驗(yàn)可能有助于監(jiān)測患者以檢測是否存在微小殘留疾病，從而在必要時進(jìn)行進(jìn)一步干預(yù)。
為了證明他們的方法的臨床潛力，對來自癌癥患者血漿的六個 DNA 樣本進(jìn)行了分析。來自五名患者的樣本是不知情的。進(jìn)行多重超選擇性 PCR 測定以確認(rèn)每個樣品中是否存在特定的人表皮生長因子受體 (EGFR) 突變.選擇這些突變是因?yàn)樗鼈兊拇嬖跊Q定了哪種靶向治療最有可能對非小細(xì)胞肺癌有效。四個樣品對不同的 EGFR 靶突變呈陽性，兩個樣品沒有給出 EGFR 靶突變的信號。將盲樣本揭盲后，發(fā)現(xiàn)兩個陰性樣本來自沒有EGFR突變的患者，而這些樣本是特意提供的作為對照。分析確定了其他樣本中先前已知的突變。值得注意的是，該分析還在一個盲樣本中發(fā)現(xiàn)了一種非常罕見的耐藥突變，這種突變以前不知道存在，這表明需要改變患者的靶向治療。
研究人員說：“這些檢測方法與傳統(tǒng)多重實(shí)時PCR的唯一區(qū)別是用 SuperSelective 引物代替了傳統(tǒng)引物。”“這些檢測可以在護(hù)理點(diǎn)快速進(jìn)行，結(jié)果可以立即用于為后續(xù)的臨床決策提供信息。”
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