光譜流式細(xì)胞術(shù)分離熒光團(tuán)彩虹

F低細(xì)胞計(jì)數(shù)是一種廣泛使用的分析技術(shù)，可根據(jù)所選標(biāo)記的存在或不存在來(lái)區(qū)分細(xì)胞群。然而，流式細(xì)胞術(shù)面板中可包含的標(biāo)記物數(shù)量受到具有可區(qū)分發(fā)射光譜的熒光團(tuán)數(shù)量的限制。光譜流式細(xì)胞術(shù)是傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)的進(jìn)化版本，通過(guò)區(qū)分相似發(fā)射的熒光團(tuán)來(lái)克服這個(gè)問(wèn)題，從而增加面板尺寸。

Kaitlyn Sadtler是 Earl Stadtman 研究員、國(guó)家生物醫(yī)學(xué)成像和生物工程研究所 (NIBIB) 免疫工程科主任，研究組織創(chuàng)傷和醫(yī)療設(shè)備植入的免疫反應(yīng)。在最近發(fā)表的《細(xì)胞組織器官》論文中，薩特勒的實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)了一種 24 色光譜流式細(xì)胞儀面板，用于研究大鼠肌肉損傷部位的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)。1

什么是流式細(xì)胞術(shù)和光譜流式細(xì)胞術(shù)?

流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞流過(guò)機(jī)器時(shí)一次測(cè)量一個(gè)細(xì)胞上不同蛋白質(zhì)的表達(dá)。你可以把它想象成穿過(guò)花園軟管的彈珠。當(dāng)每個(gè)彈珠通過(guò)時(shí)，探測(cè)器會(huì)說(shuō)“這個(gè)彈珠里面有橙色”或“這個(gè)彈珠里面有紫色”。這些不同的顏色代表熒光團(tuán)的峰值發(fā)射，這告訴我們細(xì)胞上存在哪些蛋白質(zhì)。

生活和科學(xué)中的一切都是混亂的。一些熒光團(tuán)發(fā)射多種波長(zhǎng)，因此一些大理石內(nèi)部具有紅橙色，而不僅僅是橙色或紅色。光譜流式細(xì)胞術(shù)是流式細(xì)胞術(shù)的一種，它不是查看特定通道(即橙色通道或紅色通道)中的峰值，而是查看整個(gè)光譜的模式。這項(xiàng)技術(shù)使研究人員能夠從顏色非常相似的熒光團(tuán)中區(qū)分出信號(hào)。

您為什么要為大鼠生成光譜流式細(xì)胞儀面板?

我們從事免疫學(xué)和生物工程的交叉領(lǐng)域，每個(gè)領(lǐng)域都有不同的模型系統(tǒng)。長(zhǎng)期以來(lái)，小鼠一直是免疫學(xué)的主力，因此試劑數(shù)量絕對(duì)過(guò)多。然而，研究人員在評(píng)估醫(yī)療設(shè)備和生物材料時(shí)更頻繁地使用大鼠，但試劑的可用性有限。我們希望彌合小鼠模型中進(jìn)行的基礎(chǔ)機(jī)械免疫學(xué)研究與大鼠模型中進(jìn)行的生物材料研究之間的差距。我們的目標(biāo)是弄清楚老鼠有哪些工具，將它們組裝成一個(gè)可用的工具箱，并展示該工具箱。光譜流式細(xì)胞儀使我們能夠使用類似顏色的熒光團(tuán)，而這些熒光團(tuán)不一定可以在標(biāo)準(zhǔn)流式細(xì)胞儀上一起使用。

您是如何構(gòu)建光譜流式細(xì)胞術(shù)面板的?

為了構(gòu)建我們的小組，該論文的主要作者 Kenneth Adusei 和我對(duì)現(xiàn)有的各種大鼠抗體進(jìn)行了產(chǎn)品搜索。我們創(chuàng)建了一個(gè)試劑電子表格，其中說(shuō)明了哪些供應(yīng)商擁有哪些抗體以及哪些顏色。至于選擇使用哪種熒光團(tuán)，我們需要評(píng)估樣品的自發(fā)熒光，以避免出現(xiàn)自發(fā)熒光的峰值通道。

光譜流式細(xì)胞儀的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)是什么?

光譜流式細(xì)胞術(shù)使科學(xué)家能夠區(qū)分熒光團(tuán)的真實(shí)信號(hào)與重疊熒光團(tuán)可能滲出的信號(hào)。這讓研究人員可以自信地一次測(cè)量更多顏色。他們獲得了更多想要的信息，但也獲得了自發(fā)熒光的噪音。我們使用高度自發(fā)熒光的樣本，其中一些自發(fā)熒光來(lái)自骨髓細(xì)胞本身，在我們對(duì)它們進(jìn)行染色之前，它們會(huì)發(fā)出明亮的漂亮顏色。這給了我們一個(gè)額外的變量來(lái)處理。但自發(fā)熒光也提供了大量信息。例如，我們可以僅通過(guò)嗜酸性粒細(xì)胞的自發(fā)熒光來(lái)識(shí)別嗜酸性粒細(xì)胞，無(wú)需任何標(biāo)記。這表明未來(lái)可以根據(jù)自身熒光來(lái)識(shí)別不同的細(xì)胞群。盡管額外的噪音令人痛苦，但噪音中蘊(yùn)藏著信息。我們只需要閱讀信號(hào)即可。

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