F低細胞計數(shù)是一種廣泛使用的分析技術，可根據(jù)所選標記的存在或不存在來區(qū)分細胞群。然而，流式細胞術面板中可包含的標記物數(shù)量受到具有可區(qū)分發(fā)射光譜的熒光團數(shù)量的限制。光譜流式細胞術是傳統(tǒng)流式細胞術的進化版本，通過區(qū)分相似發(fā)射的熒光團來克服這個問題，從而增加面板尺寸。
Kaitlyn Sadtler是 Earl Stadtman 研究員、國家生物醫(yī)學成像和生物工程研究所 (NIBIB) 免疫工程科主任，研究組織創(chuàng)傷和醫(yī)療設備植入的免疫反應。在最近發(fā)表的《細胞組織器官》論文中，薩特勒的實驗室開發(fā)了一種 24 色光譜流式細胞儀面板，用于研究大鼠肌肉損傷部位的免疫細胞浸潤。1
什么是流式細胞術和光譜流式細胞術?
流式細胞術在細胞流過機器時一次測量一個細胞上不同蛋白質的表達。你可以把它想象成穿過花園軟管的彈珠。當每個彈珠通過時，探測器會說“這個彈珠里面有橙色”或“這個彈珠里面有紫色”。這些不同的顏色代表熒光團的峰值發(fā)射，這告訴我們細胞上存在哪些蛋白質。
生活和科學中的一切都是混亂的。一些熒光團發(fā)射多種波長，因此一些大理石內部具有紅橙色，而不僅僅是橙色或紅色。光譜流式細胞術是流式細胞術的一種，它不是查看特定通道(即橙色通道或紅色通道)中的峰值，而是查看整個光譜的模式。這項技術使研究人員能夠從顏色非常相似的熒光團中區(qū)分出信號。
您為什么要為大鼠生成光譜流式細胞儀面板?
我們從事免疫學和生物工程的交叉領域，每個領域都有不同的模型系統(tǒng)。長期以來，小鼠一直是免疫學的主力，因此試劑數(shù)量絕對過多。然而，研究人員在評估醫(yī)療設備和生物材料時更頻繁地使用大鼠，但試劑的可用性有限。我們希望彌合小鼠模型中進行的基礎機械免疫學研究與大鼠模型中進行的生物材料研究之間的差距。我們的目標是弄清楚老鼠有哪些工具，將它們組裝成一個可用的工具箱，并展示該工具箱。光譜流式細胞儀使我們能夠使用類似顏色的熒光團，而這些熒光團不一定可以在標準流式細胞儀上一起使用。
您是如何構建光譜流式細胞術面板的?
為了構建我們的小組，該論文的主要作者 Kenneth Adusei 和我對現(xiàn)有的各種大鼠抗體進行了產品搜索。我們創(chuàng)建了一個試劑電子表格，其中說明了哪些供應商擁有哪些抗體以及哪些顏色。至于選擇使用哪種熒光團，我們需要評估樣品的自發(fā)熒光，以避免出現(xiàn)自發(fā)熒光的峰值通道。
光譜流式細胞儀的優(yōu)點和缺點是什么?
光譜流式細胞術使科學家能夠區(qū)分熒光團的真實信號與重疊熒光團可能滲出的信號。這讓研究人員可以自信地一次測量更多顏色。他們獲得了更多想要的信息，但也獲得了自發(fā)熒光的噪音。我們使用高度自發(fā)熒光的樣本，其中一些自發(fā)熒光來自骨髓細胞本身，在我們對它們進行染色之前，它們會發(fā)出明亮的漂亮顏色。這給了我們一個額外的變量來處理。但自發(fā)熒光也提供了大量信息。例如，我們可以僅通過嗜酸性粒細胞的自發(fā)熒光來識別嗜酸性粒細胞，無需任何標記。這表明未來可以根據(jù)自身熒光來識別不同的細胞群。盡管額外的噪音令人痛苦，但噪音中蘊藏著信息。我們只需要閱讀信號即可。
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