以Knut Woltjen博士為首的研究人員報道了一種新的基因編輯方法，可以絕對準確地修改人類基因組中的單個DNA堿基。
這項技術在《自然通訊》(Nature Communications)中有所描述，它的獨特之處在于它提供了成對的基因匹配細胞，通過設計細胞自身的修復機制來研究疾病相關的突變。
DNA單突變(簡稱單核苷酸多態(tài)性——或SNP)是人類基因組中最常見的突變類型。已知超過1000萬個SNP，其中許多與阿爾茨海默病、心臟病和糖尿病等疾病有關。
為了了解SNP在遺傳性疾病中的作用，來自京都大學iPS細胞研究和應用中心(CiRA)的科學家從患者供體中創(chuàng)造了誘導多能干細胞。
IPS細胞保留了供體的遺傳組成，可以在體內轉化為任何細胞類型。這樣，來自組織(如大腦、心臟或胰腺)的細胞可以在實驗室中被創(chuàng)造和觀察，這樣新的疾病治療方法就可以在開始臨床試驗之前得到安全的測試。
要證明SNP導致疾病，需要與基因匹配或同源的iPS細胞進行非常嚴格的比較。理想細胞是研究人員描述的同卵“雙胞胎”；基因組僅相差一個單核苷酸多態(tài)性的細胞。
然而，由Woltjen實驗室特別任命的助理教授、該研究的共同第一作者Shin-Il Kim博士說，創(chuàng)造這些雙胞胎并不容易。
“通常我們需要添加抗生素抗性基因和SNP來克服效率低的問題。因為這增加了基因組的另一個變化，我們需要一種方法來消除它?！?
為了創(chuàng)造同卵雙胞胎，Woltjen實驗室開發(fā)了一種新的基因組編輯技術，插入SNP修飾和熒光報告基因作為信號檢測修飾細胞。
他們還在報告基因的左右兩側設計了一個短的重復DNA序列，稱為微同源性，以及CRISPR(一種切割DNA的酶)的獨特靶位。
這些特性使得研究人員可以利用細胞的內源性DNA修復系統(tǒng)，即微同源介導的末端連接(MMEJ)來精確去除報告基因。MMEJ去除了熒光報告基因，只留下了修飾的SNP。通過在一個微觀同源性中排列突變單核苷酸多態(tài)性，在另一個微生物學中排列正常單核苷酸多態(tài)性，該方法有效地產生同卵雙胞胎。
CiRA的副教授Knut Woltjen博士稱這種新的基因編輯方法為MhAX，即微同源輔助切除。Woltjen的靈感來自于觀察自然的MMEJ修復來應對DNA損傷。
“為了讓MhAX發(fā)揮作用，我們復制了基因組中已經存在的DNA序列。然后我們讓細胞解決這個復制問題。同時，細胞決定修復后哪些單核苷酸多態(tài)性仍然存在，”他說。"一項實驗產生了所有可能的單核苷酸多態(tài)性基因型."
在廣島大學山本貴司博士和慶應義塾大學Soga tomoyshi博士的合作下，Woltjen實驗室利用MhAX在HPRT和APRT基因中創(chuàng)建SNP，突變分別與痛風和腎臟疾病有關。
生化分析顯示，具有HPRT突變SNP的細胞具有與患者相似的代謝變化，而在同一實驗中衍生的相同雙胞胎對照細胞是正常的。APRT * J突變在急性腎衰竭患者中很常見，這證明了MhAX的高效性，因為兩個基因拷貝(一個來自母親，一個來自父親)需要基因編輯來研究突變的影響。
Woltjen的實驗室已經開始應用他們的方法來創(chuàng)建和糾正與其他疾病相關的基因中的SNPs。他們與和加拿大的研究人員合作，正在調查青少年嚴重糖尿病的遺傳原因。
目前，利用胚胎干細胞進行糖尿病臨床試驗正在進行中，但需要慢性免疫抑制?；颊咦陨韎PS細胞的基因矯正，可能導致產生胰島素的健康胰腺細胞的來源，降低移植后發(fā)生排斥反應的可能性。
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